• Freddie Prinze Jr. sebagai Fred Jones
  • Ryan Vrba sebagai Fred semasa muda
• Sarah Michelle Gellar sebagai Daphne Blake
  • Emily Tennant sebagai Daphne semasa muda
• Linda Cardellini sebagai Velma Dinkley
  • Lauren Kennedy sebagai Velma semasa muda
• Matthew Lillard sebagai Shaggy Rogers
  • Cascy Beddow sebagai Shaggy semasa muda
  • Nazanin Afshin-Jam sebagai "Shaggy Chick" (jelmaan wanita Shaggy)
• Neil Fanning menyumbang suara Scooby-Doo
• Seth Green sebagai Patrick Wisely
• Peter Boyle sebagai Jeremiah Wickles
• Tim Blake Nelson sebagai Dr. Jonathan Jacobo
• Alicia Silverstone sebagai Heather Jasper Howe
• Scott McNeil sebagai Evil Masked Figure
• Kevin Durand sebagai Black Knight Ghost
• Karin Konoval sebagai Aggie Wilkins
• Joe Macleod sebagai Skater Dude No. 1
• Brandon Jay McLaren sebagai Skater Dude No. 2
• Calum Worthy sebagai Kid on bike
• C. Ernst Harth sebagai Miner 49er
• Stephen E. Miller sebagai C.L. Magnus
• Zahf Paroo sebagai Ned
• Christopher R. Sumpton sebagai the Zombie

Penyumbang suara

• Dee Bradley Baker menyumbang suara Pterodactyl / Zombie / Red-Eyed Skeleton
• Michael J. Sorich menyumbang suara Tar Monster / Cotton Candy Glob
• Bob Papenbrook menyumbang suara Black Knight Ghost
• Terrence Stone menyumbang suara 10,000 Volt Ghost
• Wally Wingert menyumbang suara Green-Eyed Skeleton
• J.P. Manoux menyumbang suara Scooby Brainiac

Pat O'Brien dan Ruben Studdard tampil sebagai kameo.